Tiszta Saposhnikovia divaricata olaj gyertya- és szappankészítőhöz nagykereskedelmi diffúzor illóolaj új nádégető diffúzorokhoz

rövid leírás:

 

2.1. SDE előkészítése

Az SD rizómáit szárított gyógynövényként vásároltuk a Hanherb Co.-tól (Guri, Korea). A növényi anyagokat taxonómiailag megerősítette Dr. Go-Ya Choi, a Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM) munkatársa. Az utalványmintát (2014 SDE-6) letétbe helyezték a Koreai Herbarium of Standard Herbal Resources-ban. Az SD szárított rizómáit (320 g) kétszer extraháltuk 70%-os etanollal (2 órás visszafolyatás mellett), majd az extraktumot csökkentett nyomáson betöményítettük. A főzetet leszűrjük, liofilizáljuk és 4 °C-on tároljuk. A nyers kiindulási anyagokból származó szárított extraktum hozama 48,13 tömeg% volt.

 

2.2. Kvantitatív nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC) elemzés

A kromatográfiás elemzést HPLC rendszerrel (Waters Co., Milford, MA, USA) és fotodiódasoros detektorral végeztük. Az SDE HPLC analíziséhez a prim-O- a glükozilcimifugin standardot a Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry-tól (Gyeongsan, Korea) vásároltuk, éssec-O- glükozil-hamaudol és 4′-O-β-D-glükozil-5-OA -metil-viszamminolt laboratóriumunkban izoláltuk és spektrális analízissel, elsősorban NMR és MS segítségével azonosítottuk.

SDE-mintákat (0,1 mg) feloldottunk 70%-os etanolban (10 ml). A kromatográfiás elválasztást XSelect HSS T3 C18 oszloppal (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). A mozgófázis acetonitrilből (A) és 0,1%-os ecetsavból vízben (B) áll, 1,0 ml/perc áramlási sebességgel. A többlépcsős gradiens programot a következőképpen alkalmaztuk: 5% A (0 perc), 5–20% A (0–10 perc), 20% A (10–23 perc) és 20–65% A (23–40 perc). ). A detektálási hullámhosszt 210-400 nm-en pásztázták, és 254 nm-en rögzítették. Az injekció térfogata 10,0 voltμL. Három kromon meghatározására standard oldatokat állítottunk elő 7,781 mg/ml végkoncentrációban (prim-O-glukozilcimifugin), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glükozil-5-O-metil-vizaminol), és 31,125 mg/ml (sec-O-glukozilhamaudol) metanolban, és 4 °C-on tartjuk.

2.3. A gyulladásgátló hatás értékeléseIn vitro

2.3.1. Sejtkultúra és mintakezelés

A RAW 264.7 sejteket az American Type Culture Collection-től (ATCC, Manassas, VA, USA) szereztük be, és 1% antibiotikumot és 5,5% FBS-t tartalmazó DMEM tápközegben növesztettük. A sejteket nedvesített, 5% CO 2 atmoszférában inkubáltuk 37 °C-on. A sejtek stimulálására a tápközeget friss DMEM tápközeggel és lipopoliszachariddal (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) cseréltük 1 °C-on.μg/ml-t adtunk hozzá SDE jelenlétében vagy hiányában (200 vagy 400μg/ml) további 24 órán át.

2.3.2. Nitrogén-oxid (NO), prosztaglandin E2 (PGE2), tumornekrózis faktor meghatározásaα(TNF-α), valamint az Interleukin-6 (IL-6) termelése

A sejteket SDE-vel kezeltük és LPS-sel stimuláltuk 24 órán keresztül. A NO-termelést nitrit méréssel elemezték Griess-reagens segítségével egy korábbi tanulmány szerint [12]. A gyulladásos citokinek PGE2, TNF- szekréciójaαés az IL-6-ot ELISA készlettel (R&D rendszerek) határoztuk meg a gyártó utasításai szerint. Az SDE NO- és citokintermelésre gyakorolt ​​hatását 540 nm-en vagy 450 nm-en Wallac EnVision segítségével határoztuk meg.™mikrolemez olvasó (PerkinElmer).

2.4. Az antiosteoarthritis aktivitás értékeléseIn Vivo

2.4.1. Állatok

Hím Sprague-Dawley patkányokat (7 hetes) a Samtako Inc.-től (Osan, Korea) vásároltunk, és ellenőrzött körülmények között tartottuk őket 12 órás világos/sötét ciklussal°C és% páratartalom. A patkányokat laboratóriumi táplálékkal és vízzel látták elad libitum. Minden kísérleti eljárást a National Institutes of Health (NIH) irányelveinek megfelelően hajtottak végre, és a Daejeon Egyetem (Daejeon, Koreai Köztársaság) Állatgondozási és Felhasználási Bizottsága jóváhagyta.

2.4.2. OA indukálása MIA-val patkányokban

Az állatokat a vizsgálat megkezdése előtt randomizálták és kezelt csoportokba sorolták (csoportonként). MIA oldat (3 mg/50μL 0,9%-os sóoldatot) közvetlenül a jobb térd intraartikuláris terébe injektáltuk ketamin és xilazin keverékével indukált érzéstelenítés alatt. A patkányokat véletlenszerűen négy csoportra osztották: (1) a sóoldattal kezelt csoport MIA injekcióval, (2) a MIA csoport MIA injekcióval, (3) az SDE-vel kezelt csoport (200 mg/kg) MIA injekcióval és (4) ) az indometacinnal (IM-) kezelt csoport (2 mg/kg) MIA injekcióval. A patkányoknak orálisan SDE-t és IM-et adtunk 1 héttel a MIA injekció előtt 4 hétig. Az ebben a vizsgálatban használt SDE és IM adagolása a korábbi vizsgálatokban alkalmazott adagokon alapult.10,13,14].

2.4.3. A hátsó mancs súlyeloszlásának mérése

Az OA indukció után a hátsó mancsok súlytartó képességének eredeti egyensúlya megbomlott. A teherviselési tolerancia változásainak értékelésére egy incapacitance tesztert (Linton instrumentation, Norfolk, UK) használtunk. A patkányokat óvatosan helyeztük a mérőkamrába. A hátsó végtag által kifejtett teherbíró erőt 3 másodperces periódusra átlagoltuk. A súlyeloszlási arányt a következő egyenlettel számítottuk ki: [jobb hátsó végtag súlya/(jobb hátsó végtag súlya + bal hátsó végtag súlya)] × 100 [15].

2.4.4. A szérum citokinszintjének mérése

A vérmintákat 1500 g-vel centrifugáltuk 10 percig 4 °C-on; majd a szérumot összegyűjtöttük és felhasználásig –70°C-on tároltuk. Az IL-1 szintjeβ, IL-6, TNF-α, és a szérumban lévő PGE2-t az R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) ELISA készleteivel mértük a gyártó utasításai szerint.

2.4.5. Valós idejű kvantitatív RT-PCR elemzés

A teljes RNS-t a térdízületi szövetből extraháltuk a TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) segítségével, cDNS-re fordítottan átírtuk, és TM One Step RT PCR készlettel SYBR zölddel (Applied Biosystems) PCR-rel amplifikáltuk. , Grand Island, NY, USA). A valós idejű kvantitatív PCR-t az Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR rendszerrel (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) végeztük. A primer szekvenciákat és a próbaszekvenciát a táblázat tartalmazza1. A minta-cDNS-ek alikvotjait és azonos mennyiségű GAPDH-cDNS-t DNS-polimerázt tartalmazó TaqMan® Universal PCR-mesterkeverékkel amplifikáltuk a gyártó utasításai szerint (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). A PCR körülményei 2 perc 50 °C-on, 10 perc 94 °C-on, 15 másodperc 95 °C-on és 1 perc 60 °C-on 40 cikluson keresztül. A célgén koncentrációját az összehasonlító Ct (küszöb ciklusszám az amplifikációs diagram és a küszöb keresztezési pontjában) módszerrel határoztuk meg, a gyártó utasításai szerint.

FOB ár:0,5–9 999 USD / darab

Min. rendelési mennyiség:100 db/darab

Ellátási képesség:10000 darab/darab havonta