Tiszta Saposhnikovia divaricata olaj gyertya- és szappankészítéshez, nagykereskedelmi illóolaj diffúzorhoz, új, nádégős diffúzorokhoz

rövid leírás:

 

2.1. Az SDE előkészítése

Az SD rizómáit szárított gyógynövényként vásárolták a Hanherb Co.-tól (Guri, Korea). A növényi anyagok taxonómiai besorolását Dr. Go-Ya Choi, a Koreai Keleti Orvostudományi Intézet (KIOM) munkatársa végezte. Egy 2014 SDE-6 számú példányt helyeztek el a Koreai Standard Gyógynövényes Erőforrások Herbáriumában. 320 g szárított SD rizómát kétszer extraháltak 70%-os etanollal (2 órás reflux mellett), majd a kivonatot csökkentett nyomáson bepárolták. A főzetet szűrték, liofilizálták és 4°C-on tárolták. A nyers kiindulási anyagokból a szárított kivonat hozama 48,13% (t/t) volt.

 

2.2. Kvantitatív nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás (HPLC) analízis

A kromatográfiás analízist HPLC rendszerrel (Waters Co., Milford, MA, USA) és fotodiódasoros detektorral végeztük. Az SDE HPLC analíziséhez az elsődlegesOA -glükozil-cimifugin standardot a Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry-től (Gyeongsan, Korea) vásároltuk, éssec-O-glükozilhamaudol és 4′-O-β-D-glükozil-5-OA -metilvisamminolt laboratóriumunkban izoláltuk, és spektrális analízissel, elsősorban NMR és MS módszerrel azonosítottuk.

Az SDE mintákat (0,1 mg) 70%-os etanolban (10 ml) oldottuk fel. A kromatográfiás elválasztást XSelect HSS T3 C18 oszlopon (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). A mozgófázis acetonitrilből (A) és 0,1%-os ecetsav vízben oldott oldatából (B) állt, 1,0 ml/perc áramlási sebességgel. Többlépéses gradiens programot alkalmaztunk a következőképpen: 5% A (0 perc), 5–20% A (0–10 perc), 20% A (10–23 perc) és 20–65% A (23–40 perc). A detektálási hullámhosszt 210–400 nm-en szkenneltük, és 254 nm-en regisztráltuk. A befecskendezési térfogat 10,0μL. Három kromon meghatározására standard oldatokat készítettünk 7,781 mg/ml végkoncentrációban (prim-O-glükozil-cimifugin), 31,125 mg/ml (4′-)O-β-D-glükozil-5-O-metilvisamminol), és 31,125 mg/ml (sec-O-glükozilhamaudol) metanolban és 4°C-on tárolva.

2.3. Gyulladáscsökkentő hatás értékeléseIn vitro

2.3.1. Sejttenyészet és mintakezelés

A RAW 264.7 sejteket az American Type Culture Collection-től (ATCC, Manassas, VA, USA) szereztük be, és 1% antibiotikumot és 5,5% FBS-t tartalmazó DMEM táptalajban tenyésztettük. A sejteket 5% CO2-t tartalmazó párásított atmoszférában inkubáltuk 37°C-on. A sejtek stimulálásához a táptalajt friss DMEM táptalajra cseréltük, és lipopoliszacharidot (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) adtunk hozzá 1μg/ml-t adtunk hozzá SDE jelenlétében vagy hiányában (200 vagy 400μg/ml) további 24 órán át.

2.3.2. Nitrogén-monoxid (NO), prosztaglandin E2 (PGE2), tumornekrózis-faktor meghatározásaα(TNF-α), és az interleukin-6 (IL-6) termelése

A sejteket SDE-vel kezeltük, majd 24 órán át LPS-sel stimuláltuk. Az NO-termelést a nitrit Griess-reagenssel történő mérésével elemeztük egy korábbi tanulmány szerint [12]. A gyulladásos citokinek, a PGE2 és a TNF szekréciójaα, és az IL-6-ot ELISA kittel (R&D systems) határoztuk meg a gyártó utasításai szerint. Az SDE NO-ra és citokintermelésre gyakorolt ​​hatását 540 nm-en vagy 450 nm-en határoztuk meg Wallac EnVision készülékkel.™mikrotiterlemez-leolvasó (PerkinElmer).

2.4. Az osteoarthritis elleni aktivitás értékeléseIn vivo

2.4.1. Állatok

A hím Sprague-Dawley patkányokat (7 hetesek) a Samtako Inc.-től (Osan, Korea) vásároltuk, és szabályozott körülmények között, 12 órás fény/sötétség ciklusban tartottuk őket.°C és% páratartalom. A patkányok laboratóriumi táplálékot és vizet kaptak.korlátlanulMinden kísérleti eljárást a Nemzeti Egészségügyi Intézetek (NIH) irányelveinek megfelelően végeztek, és a Daejeon Egyetem (Daejeon, Koreai Köztársaság) Állatgondozási és Felhasználási Bizottsága hagyta jóvá.

2.4.2. OA kiváltása MIA-val patkányokban

Az állatokat a vizsgálat megkezdése előtt véletlenszerűen osztották be kezelési csoportokba (csoportonként). MIA oldat (3 mg/50μKetamin és xilazin keverékével kiváltott altatásban 0,9%-os sóoldatot (l) injektáltak közvetlenül a jobb térd ízületi terébe. A patkányokat véletlenszerűen négy csoportra osztották: (1) sóoldatos csoport MIA injekció nélkül, (2) MIA csoport MIA injekcióval, (3) SDE-vel kezelt csoport (200 mg/kg) MIA injekcióval, és (4) indometacinnal (IM) kezelt csoport (2 mg/kg) MIA injekcióval. A patkányoknak szájon át SDE-t és IM-t adtak be 1 héttel a MIA injekció előtt 4 héten keresztül. Az ebben a vizsgálatban alkalmazott SDE és IM dózisok a korábbi vizsgálatokban alkalmazottakon alapultak [10,13,14].

2.4.3. A hátsó mancs súlyeloszlásának mérése

Az OA indukciója után a hátsó mancsok súlytartó képességének eredeti egyensúlya felborult. A súlytartó tolerancia változásainak értékelésére egy cselekvőképtelenségi tesztert (Linton instrumentation, Norfolk, Egyesült Királyság) használtak. A patkányokat óvatosan helyezték a mérőkamrába. A hátsó végtag által kifejtett súlytartó erőt 3 másodperces időszakra átlagolták. A súlyeloszlási arányt a következő egyenlettel számították ki: [jobb hátsó végtag súlya / (jobb hátsó végtag súlya + bal hátsó végtag súlya)] × 100 [15].

2.4.4. Szérum citokinszintek mérése

A vérmintákat 1500 g-vel centrifugáltuk 10 percig 4°C-on; majd a szérumot összegyűjtöttük és felhasználásig -70°C-on tároltuk. Az IL-1 szintje aβ, IL-6, TNF-αA szérumban a PGE2 és a PGE2 szintjét az R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) ELISA kitjeivel mérték a gyártó utasításai szerint.

2.4.5. Valós idejű kvantitatív RT-PCR analízis

A térdízületi szövetből teljes RNS-t vontunk ki TRI reagenssel® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), reverz transzkripcióval cDNS-sé alakítottuk, majd PCR-amplifikációt végeztünk TM One Step RT PCR kittel és SYBR green festékkel (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). A valós idejű kvantitatív PCR-t az Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR rendszerrel (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) végeztük. A primer szekvenciákat és a próba szekvenciáját a táblázat mutatja.1A minta cDNS-ek alikvot részeit és azonos mennyiségű GAPDH cDNS-t amplifikáltunk TaqMan® Universal PCR master keverékkel, amely DNS polimerázt tartalmazott, a gyártó utasításai szerint (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). A PCR körülmények a következők voltak: 2 perc 50°C-on, 10 perc 94°C-on, 15 másodperc 95°C-on és 1 perc 60°C-on, 40 cikluson keresztül. A célgén koncentrációját az összehasonlító Ct (küszöbérték ciklusszám az amplifikációs görbe és a küszöbérték közötti keresztezési ponton) módszerrel határoztuk meg, a gyártó utasításai szerint.

FOB ár:0,5–9 999 USD / darab

Minimális rendelési mennyiség:100 darab/darabok

Ellátási képesség:10000 darab/darab havonta